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氨基酸总量测定-单指示剂甲醛滴定法

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发表于 2012-4-19 11:57:03 | 显示全部楼层 |阅读模式
蛋白质经水解或酶解可由大分子变成小的蛋白质成分,如水解后的产物经月示、胨、肽等最后变成为氨基酸,氨基酸是构成蛋白质最基本的物质。
水解后的蛋白质和水解前的蛋白质在物理特性、化学结构以及被吸收消化的程度上是很不相同的,其差别与水解的程度有密切关系,分析氨基酸的含量就可以知道水解的程度,也就可以评价食品的营养价值。
氨基酸不是单纯的一种物质,用氨基酸分析仪可直接测定出17种氨基酸(仪器价格昂贵,不能普便使用),很多氨基酸可以同时存在于一种食品中,所以需要测定总的氨基酸量。它们不能以氨基酸的百分率来表示,只能以氨基酸中所含的氨(氨基酸态氮)的百分率来表示。当然,如果食品中只含有一种氨基酸,如味精中的谷氨酸,就可以从氮量计算出氨基酸的含量。
在评价蛋白质的营养价值时,除了测定蛋白质的含量,氨基酸氮量,还需要对各种氨基酸进行分离、鉴定,尤其对8种人体必需氨基酸进行定性定量分析。
原理  氨基酸具有酸、碱两重性质,因为氨基酸含有—COOH基显示酸性,又含有—NH2基显示碱性。由于这两个基的相互作用,使氨基酸成为中性的内盐。当加入甲醛溶液时,—NH2与甲醛结合,其碱性消失,破坏内盐的存在,就用碱来滴定—COOH基,以间接方法测定氨基酸的量。反应式以下面三种形式存在:
试剂?40%中性甲醛溶液,以麝香草酚酞为指示剂,以mol/LNaOH溶液中和0.1%麝香草酚酞乙醇溶液;0.100mol/L氢氧化钠标准溶液。
操作步骤
称取一定量样品(约含20毫克左右的氨基酸)于烧杯中(如为固体加水50毫升),加23滴指示剂,用0.100mol/LNaOH液滴定至淡蓝色。加入中性甲醛20毫升,摇匀,静置1分钟,此时蓝色应消失。再用0.100mol/LNaOH溶液滴定至淡蓝色,记录两次滴定所消耗的碱液毫升数,用下述公式计算氨基酸氮的含量。
计算
氨基酸态氮(%)=MV×0.014×100/W
式中:M—氢氧化钠标准溶液摩尔浓度
V—氢氧化内标准溶液消耗的总量(毫升)
W—样品溶液相当样品重量()
0.014—氮的毫摩尔质量g/mmol
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