植物中粗纤维的测定(酸碱洗涤重量法)
纤维是植物细胞壁的主要成分，常与木质素、半纤维素、果胶物质等伴生。同淀粉一样，纤维也是由葡萄糖聚合而成，但纤维素中的葡萄糖由β—1，4糖苷键连接，纤维素分子内和分子间都可形成氢键，因此它的理化性质较稳定。测定纤维素的洗涤法就是根据其化学性质稳定而用酸碱或洗涤剂将样品中的其他成分如淀粉、蛋白质等除去后而用重量法测定的。酸碱洗涤法测定纤维时，尚有部分木质素、半纤维素等留在纤维素中，另外纤维素本身也受到一定损失，因此将测定值称为“粗纤维含量”。用酸性洗涤剂的重量法测定时，所得的“酸性洗涤纤维”(ADF)包括了全部纤维素和木质素，因此通常测定结果比酸碱洗涤重量法高。对食品和饲料而言，粗纤维是泛指食物中不被消化、分解和吸收的部分。因此酸性洗涤剂法的测定结果更有意义。?本实验介绍酸碱洗涤重量法，该法系谷物籽粒(1986)、饲料(1987)和水果、蔬菜(1989)粗纤维测定的国家标准。方法原理?样品相继与一定浓度的酸碱共煮一定时间，并分别经过滤分离，洗涤残留物等操作。酸可将糖、淀粉、果胶物质和部分半纤维素水解而除去。碱能溶解蛋白质、部分半纤维素、木质素和皂化脂肪酸而将其除去。残渣再经乙醚、乙醇处理后，所得残渣干燥后减去灰分质量即为粗纤维含量。?试剂?(1)1.25%硫酸溶液［C(1/2H2SO4)=0.255±0.005mol/L］溶液浓度须经标定。?(2)1.25%氢氧化钠溶液［C(NaOH)=0.313±0.005mol/L］溶液浓度须经标定。?(3)95%乙醇(化学纯)?(4)无水乙醚(化学纯)?(5)石棉将中等长度的酸洗石棉铺于蒸发器皿中，放在600℃马福炉中灼烧16h后，加入1.25%H2SO4沸煮30min，过滤，洗净酸，同样加1.25%NaOH煮沸30min，过滤，用1.25%H2SO4洗一次，再用水洗净，烘干后于600℃马福炉中灼烧2h。石棉用后可回收再用。操作步骤?称取2—3g风干样［称准至0.0002g、0.84mm(20目)］于500ml带有冷凝器的高形杯或三角瓶中①(若样品水分含量高，将称样于80℃烘箱中干燥蒸发掉大部分水分，若脂肪＞1%时，用乙醚多次浸泡，最后除去乙醚)。加入沸腾的1.25%H2SO4溶液200ml,?②装上冷凝器，立即加热，使其在1—2min内微沸，准确微沸30±1min后停止加热，将扎有200目尼龙筛绢的抽滤管插入试样液中，在10min内抽尽酸液，再用热水洗涤残渣至溶液呈中性(蓝石蕊不变色)后抽净洗液。用沸腾的1.25%NaOH溶液将抽滤管尼龙筛绢上的残渣冲洗入烧杯，加入1.25%NaOH溶液200ml，装上冷凝器立即加热，使其在1—2min内微沸，微沸30min，停止加热，同上法在10min内抽去碱液并用热水洗涤残渣至溶液呈中性(红色石蕊不变色)后抽净洗液。残渣用水冲洗到烧杯内，并转移到铺有石棉的古氏坩埚中，在抽滤瓶上抽尽水分，用95%乙醇洗三次，每次约20ml，再用乙醚洗三次，每次20ml(脱脂样品不用乙醚再洗)。将装有纤维的古氏坩埚于130℃下干燥2h，在干燥器中冷却约30min至室温后称量(m1)，将坩埚在600℃马福炉内灼烧30min，同上冷却后称量(m2)?结果计算?粗纤维%=(m1-m2)100/m0式中m1—古氏坩埚+粗纤维+残渣中灰分(g)m2—古氏坩埚+残渣中灰分(g)?m0—干样质量(扣除水分后的样重量)(g)?注释?(1)为了保持酸、碱浓度加热过程不致因水分蒸发而增加，应用带有冷凝球的烧杯或冷凝管的三角瓶来加热?(2)如果溶液微沸时起泡较多，可预先加入几滴消泡剂如正辛醇等。
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