铜盐沉淀法测纯蛋白质
本法测定的含氮物质不包括非蛋白质物质。因此通过蛋白质换算因数而得到的是纯蛋白质%。?试剂配制?(1) 6%硫酸铜 60gCuSO4·5H2O溶于1L水中。?(2) 1.25%氢氧化钠12.5gNaOH溶于1L水中。?(3) 浓硫酸?(4) 混合催化剂称取硫酸钾(或硫酸钠)100g,硫酸铜10g，均匀混合后研细(通过0.177mm孔径)，贮于瓶中。(5) 0.025—0.05mol/L硫酸标准液?(6) 0.005—0.01mol/L硫酸标准液?测定步骤称取1.000—2.000g经过0.42mm孔径的风干样品，于150ml烧杯中加约50ml热水，放入40—50℃的水浴上加热10min。烧杯内物质还未冷时，随即加25ml16%硫酸铜溶液，然后一边搅拌，一边缓缓注入25ml1.25%氢氧化钠溶液。如此形成的碱式硫酸铜［CuSO4·Cu(OH)2］将使样品中的蛋白质沉淀。可用石蕊试纸在烧杯中检查，溶液不应是碱性反应。因为碱性反应会引起凝结的蛋白质溶解。放置0.5—1h(也可放置过夜)，用倾泻法过滤，即将沉淀上部液体沿玻棒倒到漏斗中，沉淀留在烧杯中用热水洗几次，而后将沉淀不损失地移至漏斗上，并继续用热水洗至滤液遇5%氯化钡不再产生硫酸钡白色沉淀为止。此时间接指示非蛋白质含氮物已被洗净。?将带有沉淀的漏斗在50—60℃烘干，直到失去大部分水，将滤纸及内容物从漏斗上取下，并卷成筒状，毫无损失地移入250ml开氏瓶中，用量筒加入浓硫酸20—30ml，放置2h或过夜。加入1：10硫酸铜—硫酸钾5g，倾斜置于电炉上先用小火加热，逐渐升温(避免黑色物升于瓶外)，直至出现白色蒸气后才可加大火力使沸腾，消煮至溶液呈透明的淡绿色，再消煮30min。取下凯氏瓶，冷却，用蒸馏水将消煮液一起洗入250ml容量瓶中，冷却至室温后，用水定容、摇匀。?吸取5—10ml待测液用半微量法测氮(含氮约0.5—1mg)。用普通定氮装置时，可吸取25—50ml(含氮约10—20mg)。测定同时作空白试验。注释所获蛋白质沉淀不必烘至过干，以免沉淀发脆，塞入开氏瓶时容易损失。只须烘至将滤纸卷成筒状而无水分渗出即可。??表各种作物收获物中蛋白质的含量范围(千重%)作物名称蛋白质%(干基)作物名称蛋白质%(鲜基)
菜豆洋扁豆豌豆蚕豆大豆亚麻向日葵(种仁)棉花(种仁)花生(种仁)小麦黑麦大麦燕麦稻 (种仁)玉米小米(种仁)高梁荞麦(种仁)15.0—30.524.6—34.124.0—34.027.0—35.029.4—50.42.00—30.821.1—30.228.6—42.019.3—30.014.4—24.18.3—19.410.6—20.48.0—17.37.8—14.59.0—13.210.2—21.59.5—15.312.8—19.0马铃薯?冬油菜?甜菜?萝卜?胡萝卜洋葱?大蒜?菠菜芹菜?蕃茄?茄子?辣椒?南瓜?黄瓜?甘蓝?花椰菜?浆果?核桃高梁叶高梁茎0.7—2.7?1.0—1.5?0.7—1.4?0.6—1.2?0.6—1.9?1.9—2.8?0.7?2.3?1.3—3.6?0.3—0.8?0.6—1.2?0.7—1.1?0.4—1.0?0.5—0.9?1.2—2.6?2.4?0.3—1.9?16.1—28.9?12.4—17.54.0—7.5
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